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Bioruptor水槽式非接觸式超聲破碎儀使用說明
點擊次數:4494 發布日期:2016-5-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

由比利時 Diagenode 公司開發生產的 Bioruptor 非接觸式全自動超聲破碎儀可獲得傳統超聲方法無可比擬的質量、效率和安全性。這一創新已在歐美廣泛應用,被上百篇權威雜志引用,目前最暢銷的有兩款,Bioruptor Plus和Bioruptor Pico。Bioruptor Plus通用性更廣泛,Bioruptor Pico更專注于處理微小量樣品,主要用于ChIP實驗和二代測序的前處理, Bioruptor 超聲破碎儀逐漸成為 ChIP (染色質免疫共沉淀) 研究平臺不可缺少的標準化工具。

Bioruptor工作原理
Bioruptor 超聲破碎儀采用在水槽底部安裝超聲波發生裝置的設計,傳統的探頭超聲波破碎儀,超聲波引起的微流動現象只能在靠近探頭的區域出現,而 Bioruptor 超聲破碎儀由于在水槽底部安裝了超聲波發生器,使水槽完全處于超聲波的作用范圍內,超聲作用分布廣泛而均衡, 降低了泡沫的形成。在實驗過程中,Bioruptor 超聲破碎儀自動的連續旋轉離心管則使超聲波的能量分布更為均勻。



bioruptor 原理圖

Bioruptor 超聲破碎儀在實驗過程中,樣品分別置于獨立的全密封離心管中,樣本之間不存在任何交叉污染,避免了氣霧的傳播,增強了實驗的生物安全性。對于 15ml 和50ml離心管適配器, Bioruptor 超聲破碎儀還設計了專利的共振系統,通過插入離心管中與樣品直接接觸的金屬棒傳導超聲波。這支金屬棒能夠反映水槽底部超聲發生裝置產生的超聲波,增強樣品的超聲破碎效果,但是與傳統的探頭不同,金屬棒不直接產生超聲波,不會引起腐蝕等問題。

Bioruptor使用注意事項
 
首先是水。
水分為機器用水和實驗用水。Bioruptor 水槽式非接觸式超聲破碎儀顧名思義,就是超聲能量通過水為介質穿透樣品管作用于液相樣品。
超聲波能夠實現破碎的物理原理相當復雜,目前也沒有詳細的描述,業內基本上認同是Cavitation,大部分翻譯為空化效應——液體在高頻率的脈沖拍擊下,就會產生無數的高壓點和低壓點,也就形成所謂的空洞,無數的空洞只保持毫秒級時間又被不斷形成的空洞擠爆掉,在這個過程中液體內形成超強的微觀爆炸力,這種作用力可以破碎細胞,降解蛋白質,更進一步可以剪切核酸,越來越短。

對于水的要求,首先要潔凈,簡單說就是沒有雜質,這個時候很多同學就會想到直接用超純水,絕對夠干凈。可惜干凈過頭了,超純水是去離子水,水中本該有的各種元素離子都被除去了,前面所提到的微觀爆炸力也就大打折扣了,所以一定要用潔凈的非去離子水。機器水槽里的水和樣品管里面的水都要遵循這一原則!

題外話,為什么超純水不能飲用,就是因為超純水本身離子密度不夠,自然就會析出人體里面的微量元素以求離子平衡。同樣的道理,如果Bioruptor經常使用去離子水,水槽漸漸就會由光滑的不銹鋼表面形成一個個粗糙的黑斑,原因就在于去離子水析出了水槽的金屬離子。這樣的結果是,實驗不理想,Bioruptor的水槽也被損傷了。Bioruptor水槽建議大家使用純水或者單蒸水即可。樣品管中的樣品用常規緩沖液就可以了。

其次就是避免Bioruptor高溫。
Bioruptor超聲產生器粘貼在水槽下面,高溫狀態下,一是損傷超聲產生器本身,二是損傷超聲產生器和水槽底部粘連的牢固度,由此可知還要避免Bioruptor磕碰震動,不要把它和離心機、搖床等工作時產生震動的設備放在一個實驗臺上面,最好單獨為Bioruptor找個好閨房,結實的好臺面放置。另外不要隨意挪動,總之,Bioruptor怕熱怕振蕩,謹記之。
 
Bioruptor能做什么
Bioruptor用途相當廣泛,只有你想不到沒有做不到。與傳統探頭式超聲破碎儀相比用途更廣泛,局限性是單個樣品的體積,可以很小,不能太大。
動植物組織破碎
動植物細胞破碎
酵母菌等真菌破碎
結核桿菌等細菌破碎
提取純化核酸、蛋白質和各種代謝化合物
提取制備細胞核
染色體染色質破碎
核酸片段化
腺病毒的微粒釋放
制備高效價的重組腺病毒
提取病毒DNA
土壤樣品破碎
制備納米顆粒
溶解各種難溶試劑
制備油水乳濁液
省略號
 
Bioruptor的日常保養
 
1.保證水槽里水溫穩定4℃
最主要是避免Bioruptor過熱,同時4℃的水密度最大,超聲效果也最好。Bioruptor超聲產生器粘貼在水槽下面,帶動水槽產生高頻率超聲波,一部分作用于樣品,另一部分基本上全都轉化為熱能,Bioruptor功率強悍,發熱也就很迅速,對于Bioruptor而言,它最怕熱怕熱怕熱,極其損傷儀器壽命。
 
2.保證Bioruptor連續使用時間少于一個小時
使用后保證儀器開機不工作狀態散熱至少半小時,水槽水溫保證是4℃,不等于長時間工作的Bioruptor水槽下面的核心元件是4℃,所以一定要在Bioruptor工作一個小時后,保證Bioruptor主機處在開機不工作狀態至少半個小時,主機散熱片可以有效地排熱降溫。
 
3保證每周更換一次純水
Bioruptor水槽里的水要定期更換,保證水的潔凈度。如果是長時間不使用的話,請排干。再次提醒,禁止使用去離子水
 
4.保證Bioruptor停止超聲后再取出樣品管適配器
樣品管適配器放置在Bioruptor水槽上方,與水槽蓋上的步進電機齒輪嚙合,在Bioruptor工作時電機恒速緩慢轉動,帶動樣品管適配器轉動,這樣超聲能量分布更均勻。在設定循環數完成后或者按stop按鈕,電機才會停止轉動,中途不可以直接取出適配器,長時間如此不正當操作會損壞步進電機。
 
5.保證每個循環的超聲時間小于等于暫停時間
原因很簡單,降溫降溫降溫,怕熱怕熱怕熱。Bioruptor默認的是30sON/30sOFF。你也可以遵循default即可。

Bioruptor的耗材選擇

一是選進口的
國產的參差不齊,選擇起來比較犯難,同時一個牌子的批間穩定性又不好說,超聲波需要穿透管壁,這就要求管壁的均一性要好。畢竟不是常用耗材,用量少,索性就選進口的,比如常用的Axygen,Eppendorf的,15ml或者50ml的也可以選用Corning和Falcon的。對于珍貴的樣品,可以選用低吸附樣品管,進口的幾個大品牌都有,Bioruptor廠家的就是低吸附的,對于有些實驗要求嚴苛,非常難處理,可以考慮。
 
二是選透明度高、管壁薄的,質地比較硬比較脆的
這種管子利于超聲波更容易的傳輸,提高超聲波利用效率。
 
三是一旦選定某種管子,就不要在實驗中途更換其他管子。
建議根據實驗消耗量,盡量一次性買夠,盡力保證耗材方面沒有誤差產生。
 
另外補充一句,有的實驗室會涉及到用Bioruptor plus 非接觸式全自動超聲破碎儀用來破碎微量組樣品,比如微生物和動植物組織等提取核酸蛋白,由于該儀器超聲波強度非常大,即使調到設備低檔也不太好控制破碎程度,很可能把目的產物破壞掉,為了降低其超聲效率,那就需要用與原則二正好相反的方式選擇管子。

Bioruptor的使用技巧
 
1.每天第一個使用Bioruptor效率會最高,Bioruptor超聲破碎儀同樣也有超聲衰減的固性,超聲產生器會有疲勞衰減的現象,其原因無外乎超聲產生器工作后變熱了,所以選擇每天第一次使用Bioruptor,效率也是最好的。
這也是Bioruptor優于傳統探頭式超聲破碎儀的地方, 傳統的超聲波破碎儀一次只能處理一個樣品,實驗周期長,Bioruptor 超聲破碎儀,一次可同時檢測 6 至 12 個樣品,實驗效率高,不存在批間差異。

2.每次填滿補齊適配器
Bioruptor 超聲破碎儀廠商建議無論每次處理幾個樣品都把空余的樣品管孔用空白對照樣品管補齊,保證每次超聲能量分部均勻,便于建立穩定的實驗優化條件,這樣子每次無論處理幾個樣品,都可以保證每次用相同時間處理一定得出相同的處理結果。

3.三分法振蕩離心樣品管
特別針對于樣品量非常少的體系,比如10ul,Bioruptor超聲能量大,很容易就把樣品管中微量的樣品顛兒到管壁上,超聲失效。所以要根據你的實驗循環數定期振蕩離心樣品管,保證樣品有效超聲。比方說你要做15個循環,就把機器調整為5個循環,5個循環結束后,步進電機也停止轉動,取出適配器,取出樣品管振蕩離心,然后再上機器處理5個循環,接下來同樣取出適配器,取出樣品管振蕩離心,接下來再處理5個循環即可。同時也建議不要建立太微量的樣品體系,盡量多一些,這樣子就可以避開無效超聲。
 
4.最后建議大家的是一個原則,超聲時間能少則少
超聲時間不是越長效果就越好,這也同樣遵循邊際效應,如果通過5個超聲循環處理已經獲得目的產物,6個循環沒有明顯的改善,以后就保證只用5個超聲循環處理。超聲波沒有選擇性地在破碎樣品,處理時間越長往往導致更多的干擾項。所以奉勸大家,能少超堅決不多超!

來源:上海博誼生物科技有限公司
聯系電話:021-51691651
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